iCLIP技術(shù)的發(fā)明，讓人們拋棄精密的觀測儀器，也能確定RNA(核糖核酸)和蛋白質(zhì)在哪個(gè)位置“交匯”，甚至可以讀出位點(diǎn)“密碼”。

生物學(xué)者習(xí)慣將iCLIP這個(gè)詞拆解為3部分，i：單點(diǎn)，就像捋著一條繩子，看它上面哪里打了個(gè)結(jié)，哪里掛了“燈籠”;CL：交聯(lián)，通過紫外照射等方法讓細(xì)胞內(nèi)RNA和蛋白質(zhì)的關(guān)系好成“老鐵”，扯也扯不斷;IP：沉淀，把“老鐵們”從細(xì)胞里“薅”出來，有目的地處理。

iCLIP技術(shù)難，猶如萬千人海中找一個(gè)人，要從幾十億個(gè)堿基對找到一個(gè)或幾個(gè)確定的結(jié)合點(diǎn)，精確度可想而知。自2010年該技術(shù)在《細(xì)胞》上首發(fā)，近幾年已逐漸成為相關(guān)領(lǐng)域論文登上CNS(《細(xì)胞》《自然》《科學(xué)》)頂級(jí)刊物的“標(biāo)配”實(shí)驗(yàn)技術(shù)，國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室卻極少有成熟經(jīng)驗(yàn)。

有文章報(bào)道，國外研究團(tuán)隊(duì)已在RNA操控中展開“技術(shù)競賽”，研究論文以幾個(gè)月為周期輪番在CNS上演。越來越多證據(jù)顯示，非編碼RNA同樣控制著生命活動(dòng)，RNA上大量未被發(fā)現(xiàn)的作用位點(diǎn)，可能是創(chuàng)新藥的潛在靶點(diǎn)，iCLIP是發(fā)現(xiàn)潛在靶點(diǎn)的“利器”之一。

條件摸索耗時(shí)耗力耗感情

“條件的摸索純粹是體力活。”一位熟悉該技術(shù)的研究人員表示，雖然實(shí)驗(yàn)技術(shù)無需購買、不受專利限制、能夠從期刊文獻(xiàn)中學(xué)來，但從國外期刊中檢索到的技術(shù)路線完全無法照搬，不同種類細(xì)胞(淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等)需要一整套完全不同的技術(shù)體系。

以IP那部分“免疫共沉淀”為例，要想“薅”對“老鐵”，必須要選擇正確的抗體，進(jìn)行正確的抗原抗體反應(yīng)。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、裂解等多步實(shí)驗(yàn)之后，研究人員才能知道抗體對不對，科研團(tuán)隊(duì)通常會(huì)從多家公司購買抗體，同時(shí)從公司定制，多條腿走路，否則浪費(fèi)時(shí)間和情感。

普遍認(rèn)為，實(shí)驗(yàn)室如果沒有對某一個(gè)蛋白的抗原抗體反應(yīng)的經(jīng)驗(yàn)積累，不熟悉幾個(gè)靠譜的抗體生產(chǎn)公司，那是不敢貿(mào)然嘗試“薅”這一步的。“很費(fèi)時(shí)間，抗體是特異性的，3—6個(gè)月才能生產(chǎn)出來，也很費(fèi)錢，一小管抗體好幾千元。”該研究人員說。

裂解液濃度、RNA酶的確定完全是基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)的方法，“掃蕩式”的排查之后才能夠確定合適的濃度和種類。加“陡”了，很可能什么都得不到，加少了，又會(huì)留下很多雜質(zhì)，摸索就是在“不漏網(wǎng)一個(gè)”和“不錯(cuò)殺一千”中尋求平衡點(diǎn)。

“RNA比DNA脆弱。”清華大學(xué)生命科學(xué)院教授楊茂君說，因此對反應(yīng)條件的控制相當(dāng)苛刻，容錯(cuò)度較低。

“摸條件很枯燥，是體力活，要不斷重復(fù)，要耐得住寂寞。”一位完成iCLIP實(shí)驗(yàn)流程的研究人員回應(yīng)，有很多實(shí)驗(yàn)室來交流，也提出要借儀器，還抄走了整個(gè)流程，但是全部沒了下文。“這個(gè)技術(shù)，不下定決心去做，是很難順利地走下來的。”

小小接頭成了CNS論文的“攔路虎”

核酸接頭是整個(gè)iCLIP實(shí)驗(yàn)中最核心的關(guān)鍵物質(zhì)之一。它能夠引導(dǎo)DNA(與RNA對應(yīng))富集從頭開始，把特定序列變多并被探測到，最終“撈出海面”，這就好比放出個(gè)“信號(hào)智能追蹤器”，精確匹配、忠誠錨定序列末端是對它的基本要求。

國內(nèi)的方法是設(shè)計(jì)隨機(jī)引物，廣撒薄收，總會(huì)撞上某一段。但隨機(jī)引物接不上RNA和蛋白質(zhì)結(jié)合的位點(diǎn)，必須特別設(shè)計(jì)從頭開始的接頭合成對應(yīng)的DNA鏈，把RNA“拓印”下來，進(jìn)行測序。

“特別設(shè)計(jì)”在某些實(shí)驗(yàn)中體現(xiàn)為預(yù)腺苷化、磷酸化的處理，但在國內(nèi)買不到此類“接頭”。事實(shí)上，在擁有雄厚技術(shù)實(shí)力、大量知識(shí)產(chǎn)權(quán)的大公司的國家，基因測序公司提供包括接頭合成在內(nèi)的服務(wù)，國內(nèi)卻找不到。

“我們之前也沒下決心一定要做iCLIP。”該研究人員說，但是有篇論文投稿了《自然》，審稿人要求完成iCLIP，當(dāng)時(shí)實(shí)驗(yàn)室決定補(bǔ)充其他內(nèi)容改投《細(xì)胞》，換了個(gè)期刊，審稿人仍然要求完成iCLIP。最終，實(shí)驗(yàn)室不得不從國外買來引物，完成本該是產(chǎn)業(yè)的部分工作，滿足了審稿人的要求。

小試劑，折射化學(xué)工業(yè)差距

這不是“小試劑”第一次卡住中國生物產(chǎn)業(yè)的脖子。

多年前，我國某基因測序企業(yè)購買Illumina公司生產(chǎn)的基因測序儀，由于Illumina公司突然對匹配的易耗品“試劑盒”提價(jià)，給企業(yè)經(jīng)營造成巨大影響。該企業(yè)最終下定決心砸巨資購買另一家掌握核心技術(shù)的國外制造企業(yè)，最終有了中國自己的基因測序儀。

不只接頭，用化學(xué)方法在RNA某個(gè)核苷酸的第6個(gè)位點(diǎn)上，直接連接上一個(gè)分子基團(tuán)，這種“指哪打哪”的精細(xì)活，國內(nèi)的生物公司基本還沒涉足。

“這些應(yīng)用技術(shù)都建立在基礎(chǔ)研究之上。”中美冠科生物技術(shù)公司毛冠平博士認(rèn)為，理論基礎(chǔ)研究比想象中更重要?；瘜W(xué)是生物的基礎(chǔ)，但由于行業(yè)的“老舊”，精密化學(xué)合成的底子被扔下了多年，生命科學(xué)研究中的多種試劑盒也是國外產(chǎn)品比國內(nèi)產(chǎn)品的口碑好。

“我國的創(chuàng)新藥真要有突破，就要從靶點(diǎn)做起。”中科院院士、四川大學(xué)教授魏于全認(rèn)為，要做創(chuàng)新藥，發(fā)現(xiàn)新靶點(diǎn)的基礎(chǔ)研究必不可少，而這類論文無疑應(yīng)有實(shí)力見諸CNS頂級(jí)刊物。

化學(xué)藥新藥的藥效原理目前是對體內(nèi)某一關(guān)鍵蛋白質(zhì)作用位點(diǎn)的“鉗制”或者“激活”。拋開后續(xù)的臨床安全評價(jià)不談，單從有效性上看，高水平的、能夠精確到作用位點(diǎn)的研究不可或缺。魏于全感到緊迫：“別人把靶點(diǎn)都發(fā)現(xiàn)了，又有技術(shù)，怎么可能做不出來新藥。如果用別人的靶點(diǎn)，做出來的藥也很難是新藥。”

無論新藥創(chuàng)制有沒有“新藍(lán)海”，仍在于精確位點(diǎn)上的較量。

關(guān)鍵詞： 靶點(diǎn) 國產(chǎn)